大鼠抗内皮细胞抗体(AECA)ELISA试剂盒

本试剂盒基于间接ELISA检测原理，将大鼠血管内皮细胞特异性抗原包被于酶标板微孔，待测样本中的AECA可与固相抗原特异性结合，洗涤去除未结合物质后，加入HRP标记的抗大鼠二抗进行孵育结合，酶促显色终止后检测吸光度，吸光度数值与样本中抗内皮细胞抗体含量成正比，依托标准曲线完成定量检测。
基本参数‌：

产品名称：大鼠抗内皮细胞抗体(AECA)ELISA试剂盒

英文名称：AECA ELISA Kit
货号：Y-E1232

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测灵敏度≤0.11ng/mL

检测范围：0.22ng/mL - 13ng/mL

反应时间：总反应时长135分钟

保存条件：2-8℃避光冷藏，酶标板真空密封保存

有效期：未开封有效期8个月

显色系统：双组分TMB显色，避光反应15分钟

检测波长：450nm检测，600nm校准

标准曲线绘制：五梯度标准品，四参数Logistic拟合

特异性：特异性结合大鼠血管内皮细胞抗体，无内皮同源蛋白交叉反应

重复性：板内CV≤8.2%，板间CV≤9.8%

注意事项：样本无脂血、无浑浊；洗涤步骤严格规范，减少非特异性吸附
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

试剂盒室温回温 27min，稀释洗涤液，调配酶标记液。

孔位分组加样，空白孔添加稀释液，标准品、质控、待测样本稀释后加孔并加入酶试剂。

封板后 37℃孵育 63min。

洗板 5 次，浸泡 31s / 次，彻底拍干板孔液体。

底物避光显色 13min。

终止液混匀终止反应。

450nm 酶标仪读数，计算 AECA 抗体水平。
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