本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测原理，酶标板预先包被大鼠sCD86捕获抗体，待测样本中的可溶性CD86抗原可与固相抗体特异性结合，洗去游离组分后，加入酶标记sCD86检测抗体形成夹心复合物，经显色、终止反应后检测吸光度，吸光度值与样本sCD86含量正相关，通过标准曲线精准定量样本抗原浓度。
基本参数：
产品名称：大鼠可溶性CD86(B7-2/sCD86)ELISA试剂盒
英文名称：sCD86 ELISA Kit
货号：Y-E1274
规格：48T/96T
灵敏度：最低检测浓度小于0.8 pg/mL
检测范围：2.0 pg/mL - 70 pg/mL
反应时间：全程110分钟（样本孵育50min、酶标孵育30min、显色30min）
保存条件：2-8℃密封避光保存，浓缩洗涤液低温可能结晶，室温溶解摇匀后使用
有效期：原装未开封12个月，开封后试剂1个月内用完
显色系统：TMB单一稳定显色体系，酸性终止液终止显色
检测波长：450nm读数，600nm校准背景值
标准曲线绘制：梯度标准品稀释，四参数对数拟合绘图，R²≥0.990，空白孔调零校正
特异性：专一结合大鼠sCD86蛋白，与CD80、其他B7家族分子无明显交叉反应，种属交叉反应极低
重复性：板内CV≤7%，板间CV≤9%
注意事项：样本稀释比例需严格按照说明书操作；孵育过程需密封保湿，避免孔内液体蒸发；试剂严禁混用不同批次产品；检测废液需统一无害化处理。
实验前准备工作：
1. 试剂平衡与稀释
试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。
浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。
标准品复溶 / 梯度稀释：
冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；
按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。
待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。
2. 耗材与设备准备
设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。
耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。
取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。
3. 孔位规划标记
酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：
试剂盒室温平衡 34min，稀释浓缩洗涤缓冲液备用。
排布酶标板孔位，空白孔只加稀释液，标准品、质控、待测稀释样本与酶结合试剂一同加入对应微孔。
密封酶标板，37℃孵育 69min。
洗板 5 次，浸泡 34s / 次，彻底吸干洗液残留。
显色 AB 液避光显色 18min。
终止液混匀终止反应。
450nm 波长测 OD 值，换算 sCD86 含量。
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