毒蛇因子(CVF) ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测原理，酶标板微孔内包被毒蛇因子（CVF）特异性抗体，样本与标准品中的CVF抗原可与固相抗体特异性结合，洗去游离杂质后，加入酶标记特异性检测抗体构建夹心免疫结构，经底物显色反应产生有色产物，显色强度与样本中CVF含量呈正相关，通过酶标仪检测吸光度并对照标准曲线，即可定量检测毒蛇因子的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测下限0.02ng/mL，超高灵敏度检测微量毒蛇补体因子。

检测范围：0.04ng/mL - 60ng/mL，适配蛇毒样本、中毒模型生物样本检测。

反应时间：快速检测时长70分钟，简化孵育流程，抗原结合25分钟，显色15分钟。

保存条件：2-8℃避光冷藏，严禁冷冻，CVF活性蛋白冷冻后完全失活。

有效期：原装未拆封有效期10个月。

特异性：特异性结合毒蛇因子CVF，与动物补体因子、蛇毒其他成分无交叉反应。

重复性：板内CV≤4%，板间CV≤6%，微量毒素因子检测误差极低。

注意事项：实验全程做好安全防护；样本需低温避光保存，防止CVF活性衰减。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒室温放置 33min，稀释浓缩洗涤液，取出预包被微孔板备用。

配制 CVF 梯度标准液，待测蛇毒稀释样本分装，每孔加入 56μL 样本或标准品溶液。

一步法直接滴加酶标记竞争抗原液 104μL，封板密封微孔板。

37℃避光孵育 63min，发生竞争免疫结合反应。

洗板 5 次，每次洗涤液浸泡 36s，彻底甩干孔内废液。

避光加入显色底物液 100μL，低速震荡，室温显色 18min。

终止液终止显色反应，酶标仪 450nm 读取 OD 值，反向计算样本 CVF 浓度。