人N端外显肽(Ext-N)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测原理，固相酶标板包被人Ext-N特异性捕获抗体，加入梯度标准品和待测生物样本，样本中的N端外显肽与固相抗体特异性结合，孵育洗涤后加入HRP标记的Ext-N检测抗体，构建特异性免疫复合物，经TMB底物显色、终止反应后检测吸光度，对照标准曲线定量测定样本中Ext-N的含量。
基本参数‌：

产品名称：人N端外显肽(Ext-N)ELISA试剂盒

英文名称：Ext-N ELISA Kit
货号：Y-E2687

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测灵敏度0.12ng/mL，适配细胞外肽段微量检测

检测范围：0.24ng/mL - 22ng/mL，覆盖细胞分泌肽段正常及异常表达区间

反应时间：全流程实验时长90分钟

保存条件：2-8℃密封避光保存，肽段试剂易降解，需严格密封

有效期：未开封有效期12个月，开封后20天内用完

特异性：专一识别Ext-N肽段，无同源外显肽交叉反应

重复性：板内、板间变异系数均＜8%

注意事项：样本采集后快速低温保存，防止肽段降解；实验全程低温避光操作
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

试剂室温平衡 35min，配制洗涤工作液；Ext-N 标准品稀释梯度浓度，体液样本离心去除颗粒物。

预包被板各孔加入标准品、待测样本 100μL，空白孔添加稀释液。

全部孔加入酶结合抗体工作液 100μL，混匀封板。

37℃孵育 73min，维持孵育环境湿度。

洗板 5 次，每孔浸润 40s，吸水纸吸干残液。

TMB 显色避光显色 19min。

终止显色，450nm 波长检测吸光度，计算 Ext-N 含量。
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