人瘢痕性天疱疮抗体(CP)ELISA试剂盒

本试剂盒采用间接酶联免疫吸附试验原理，本试剂盒在酶标板固相载体上预先包被纯化的人瘢痕性天疱疮(CP)特异性抗原，检测时加入待测样本，样本中若存在CP特异性抗体，将与固相抗原发生特异性免疫结合，洗板去除未结合的游离成分后，加入HRP标记的抗人免疫球蛋白二抗，与样本结合的特异性抗体相结合；经底物显色、终止反应后检测吸光度，吸光度数值与样本中CP抗体含量呈正相关，通过标准曲线可实现精准定量检测。
产品参数：

‌灵敏度：阳性判定临界 OD 值 0.12

检测范围：抗体滴度 1:10 ~ 1:640

反应时间：样本稀释液孵育 150min，酶标抗人 IgG 90min，显色 20min

显色系统：即用型 TMB 显色底物

检测波长：450nm

特异性：特异性结合抗 BP180/BP230 瘢痕天疱疮自身抗体，不识别类天疱疮其他亚型抗体

重复性：板内 CV＜9%，板间 CV＜12%

注意事项：血清样本需 56℃灭活补体；阴性对照、空白孔必须同步设置
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

包被微孔板室温放置 26min，阴性、阳性对照品稀释配制，血清样本直接加样。

每孔加入待测血清、对照品 100μL，空白孔加稀释液，加入标记二抗 50μL 封板。

37℃湿盒孵育 89min。

洗涤液洗板 5 次，每次浸泡 40s，去除未结合抗体。

加入 HRP 底物显色液 100μL，避光显色 17min。

终止液 50μL 终止酶促反应。

450nm 读取吸光度，判定抗体阳性强弱与浓度水平。