人不透光相关蛋白(OPAs)ELISA试剂盒

本试剂盒基于酶联免疫吸附双抗体夹心原理，固相微孔板包被人OPAs特异性抗体，待测样本中的不透光相关蛋白与固相抗体特异性结合，经洗涤去除未结合成分后，加入酶标配对检测抗体形成免疫夹心结构，充分反应后洗涤净化体系，加入底物发生酶促显色反应，显色强度与样本中OPAs浓度呈正相关，通过酶标仪检测吸光度，结合标准曲线实现样本靶蛋白的定量检测。
产品参数：

‌灵敏度：检出限 0.06ng/mL

检测范围：0.2ng/mL–12.8ng/mL

反应时间：120min，样本孵育 60min，酶二抗 45min，避光显色 15min

显色系统：A、B 液混合后显色，硫酸终止

检测波长：450nm，参比 620nm

特异性：针对奈瑟菌 OPAs 人源结合抗体，无其他菌体蛋白交叉

重复性：批内 CV≤6.7%，批间 CV≤8.5%

注意事项：细菌裂解液样本需高速离心上清检测；显色液混合后 30min 内用完。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

整套试剂盒室温平衡 30min，配制 OPAs 系列梯度标准品，在酶标板上标注每孔对应样本类型。

向各微孔分别加入标准品溶液、待测组织匀浆上清、空白稀释液，加样无交叉滴漏。

一步加入酶结合物工作液密封封板，37℃恒温避光孵育 72min，完成免疫复合物组装。

倾倒孔内液体，洗涤液加满每孔浸泡 35s，连续洗板 6 次，倒扣充分拍干微孔。

加入显色液避光室温显色 17min，观察标准品孔由浅至深蓝色梯度。

加注终止液终止显色反应，轻柔摇晃酶标板使液体混合均匀。

450nm 波长测定吸光度，换算样本 OPAs 浓度，记录并备份检测结果。