人细胞角蛋白13(CK-13)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双夹心ELISA免疫检测原理，固相酶标板包被抗人CK-13特异性抗体，特异性捕获样本中的细胞角蛋白13，孵育结合后洗除体系杂质，加入酶标记二抗形成稳定的抗体-抗原-酶标抗体复合物，洗板后进行酶促显色反应，终止后检测吸光度，结合标准曲线定量检测样本中CK-13的含量。
基本参数‌：

产品名称：人细胞角蛋白13(CK-13)ELISA试剂盒

英文名称：CK-13  Elisa Kit
货号：Y-E219

规格：48T/96T

灵敏度：≤0.08ng/mL

检测范围：0.15～12.4ng/mL

反应时间：室温孵育 81min，二抗 50min，显色 17min

保存条件：试剂盒 2～8℃，开封板条必须密封加干燥剂

显色系统：A、B 液分开取用混合显色

检测波长：450nm 主波长，620nm 扣除背景

标准曲线绘制：7 个浓度梯度，R² 需大于 0.995 方可使用曲线

注意事项：上皮组织样本避免角质碎屑混入，会造成结果虚高
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

试剂盒室温静置 35min，CK13 特异性抗体包被板弃孔内封存液，洗涤液洗板 2 次，倒扣拍干微孔。

划分孔位：空白孔、倍比标准品孔、上皮组织裂解样本孔；标准品孔加入 CK13 标准品 50μL，样本孔加入稀释裂解液 50μL，空白孔添加稀释缓冲液。

每孔加入酶标检测抗体 50μL，封板密封，37℃恒温孵育 63min。

去除封板膜倾倒废液，洗涤液注满每孔静置 30s 丢弃，洗板 4 次，吸水纸彻底拍干。

每孔加入显色底物混合液 100μL，避光 37℃显色 18min。

加入终止液 50μL，轻微晃动终止显色。

450nm 波长读数，标准曲线换算 CK13 蛋白浓度。
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