人细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心酶联免疫吸附原理，酶标板微孔固定抗人CYFRA21-1特异性抗体，样本中的细胞角蛋白21-1片段与固相抗体特异性结合，孵育反应后洗除游离杂质，加入HRP标记二抗构建免疫复合物，再次洗板后进行底物显色，显色深浅与CYFRA21-1含量正相关，通过标准曲线分析实现精准定量。
基本参数‌：

产品名称：人细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)ELISA试剂盒

英文名称：CYFRA21-1   Elisa Kit
货号：Y-E247

规格：48T/96T

灵敏度：≤0.03ng/mL

检测范围：0.06～6.8ng/mL

反应时间：样本孵育 96min，二抗 60min，显色 15min

保存条件：试剂盒 2～8℃冷藏避光，严禁冷冻结冰

显色系统：增强灵敏度型 TMB 显色液

检测波长：450nm 主波长读数

标准曲线绘制：设置阴阳对照质控，四参数拟合定量标准曲线

注意事项：肺部炎症样本易出现轻度升高，不可单独作为肿瘤判定依据
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

试剂盒室温静置 30min，CYFRA21-1 双抗体夹心包被板弃孔内保存液，洗涤液洗板 1 次，吸水纸拍干微孔。

设立空白孔、倍比标准品孔、血清样本孔；标准品孔加入 CYFRA21-1 梯度标准品 60μL，样本孔加入稀释血清 60μL，空白孔添加稀释缓冲液。

每孔加入 HRP 标记配对抗体 60μL，封板膜封闭，37℃湿盒孵育 72min。

掀开封板倒掉废液，洗涤液浸泡每孔 30s 弃液，连续洗板 5 次，彻底拍干微孔。

配制显色工作液每孔加 100μL，避光 37℃显色 12min。

每孔加注终止液 50μL 混匀终止底物反应。

450nm 酶标仪检测吸光度，定量 CYFRA21-1 肿瘤标志物水平。
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