5'-O-(4,4-二甲氧基三苯甲基)-2'-O-[(叔丁基)二甲基硅基]-N-异丁酰基鸟苷-3'-(2-氰基乙基-N,N-二异丙基)亚磷酰胺的制备

简介

5'-O-(4,4-二甲氧基三苯甲基)-2'-O-[(叔丁基)二甲基硅基]-N-异丁酰基鸟苷-3'-(2-氰基乙基-N,N-二异丙基)亚磷酰胺为白色至类白色疏松泡沫状固体，极易吸潮；常温下可完全溶于无水乙腈、二氯甲烷、DMF等常规有机溶剂，微溶于甲醇或乙醇，几乎不溶于水。作为亚磷酰胺单体，须在干燥惰性气氛（氩气或氮气）及–20 °C条件下避光保存。

5'-O-(4,4-二甲氧基三苯甲基)-2'-O-[(叔丁基)二甲基硅基]-N-异丁酰基鸟苷-3'-(2-氰基乙基-N,N-二异丙基)亚磷酰胺的性状

制备

将激活剂碱（1.1至1.2等量）添加到溶剂中，随后在环境温度下将0.95至1.1等量的激活剂酸添加到溶剂中以形成激活剂溶液。将约1等量的受保护核苷溶解在单独容器中约10等量的溶剂中，然后在减压下蒸馏出约3等量的溶剂。将约1 ~ 1.2等量的2-氰乙基-N，N,N′，N′-四异丙基磷二胺在室温下加入核苷混合物中，然后将之前制备的活化剂溶液加入核苷混合物中，并在室温下剧烈搅拌。12小时后，用甲苯稀释反应混合物，用水冲洗。将有机层分离，必要时用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。然后使用高效液相色谱技术计算所需中间体的产率，也就是说，使用适当的洗脱液将所得产品混合物通过高效液相色谱柱，并使用高效液相色谱峰下的面积来确定混合物中产品的产率。根据本发明，这些实例说明了几种受保护的核苷试剂与2-氰乙基-N，N，N‘，N’-四异丙基磷二胺在Hunig碱基- tfa活化剂存在下的磷酸化。根据示例1-11的通用程序，将公式III（下）的7种核苷试剂与2-氰乙基-N，N，N‘，N’-四异丙基磷二胺在Hunig碱- tfa活化剂存在下反应，通过两种方法中的一种计算产物得率：(1)使用合适的洗脱液将所得产物混合物通过HPLC柱，HPLC峰下面积用于确定混合物中产物得率%；或者在短硅胶柱上使用甲基乙酸/甲苯混合物（浓度取决于被纯化的特定产品）纯化所得产物。适当的产品馏分在减压和溶剂下浓缩，直到获得所需酰胺的约50%溶液。将该溶液加入约5至25等量的石油醚，沉淀出用石油醚过滤和洗涤的产物。然后将产品干燥，称重，并计算收率的百分比得到终产物5'-O-(4,4-二甲氧基三苯甲基)-2'-O-[(叔丁基)二甲基硅基]-N-异丁酰基鸟苷-3'-(2-氰基乙基-N,N-二异丙基)亚磷酰胺[1]。

参考文献

[1] Werner, Christian; et al. Phosphitylation of nucleosides with 2-cyanoethyl-N,N,N',N'-tetraisopropylphosphorodiamidite using amine-acid complex activators in synthesis of DNA. World Intellectual Property Organization.