在各种动物胆汁中,猪胆汁是最常见且产量最大的,自古代开始就被广泛应用于临床,如用猪胆汁治疗急性黄疸型传染性肝炎、百日咳、急性肠炎以及胃溃疡等,均能收到良好的治疗效果。猪胆汁中主要含胆汁酸类、胆色素、粘蛋白、脂类及无机物等,胆汁酸则主要包含猪去氧胆酸、猪胆酸、鹅去氧胆酸、3α-羟基-6-氧-5α-胆烷酸以及胆石酸等。其中猪去氧胆酸约占40%,鹅去氧胆酸约占25%。
猪胆酸化学名为3α,6α,7α-三羟基-5β-胆烷酸,分子式为C24H40O5，分子量408.577,CAS号 547-75-1,为白色针状结晶，易溶于乙醇,冰乙酸,几乎不溶于水,熔点为188~189℃。
猪胆酸具有降低血液胆固醇的作用,可用于治疗高血压及血管粥样硬化;对革兰氏阳性菌有较好的抑制作用,特别是对白色葡萄球菌的抑菌作用较好,近年还有报道其对人早幼粒白血病有一定的治疗作用。猪胆酸也是人工牛黄及清开灵的主要成分,并可作为原料合成稀缺胆汁酸熊去氧胆酸。
分离方法[1]
(1)取250ml圆底烧瓶,加入猪总胆汁酸粗品10g,无水甲醇50ml,98%浓硫酸0.7ml,于常温下搅拌反应24h,经TLC检测反应完毕,无原料残留后停止反应,向体系中加入无水NaHCO3固体调pH至中性,滤去无机盐,滤饼用甲醇洗涤,合并滤液及洗液,减压回收甲醇,得棕褐色粘稠物，加水50ml以溶解其中剩余的无机盐,再以乙醚分次提取有机物(50ml,30ml,20ml),合并有机相,经洗涤、干燥、重结晶得到的白色粉末于红外灯下干燥至恒重,得到4.5g猪总胆汁酸甲酯;
(2)取100ml圆底烧瓶,依次加入猪去氧胆酸甲酯(4.5g),NaOH固体(1.1g),乙醇30ml,水1m1,于80℃下搅拌回流反应20h, TLC监测反应完毕后,减压回收溶剂至干,得淡黄色固体,加水30ml,在剧烈搅拌下加10%稀盐酸调pH至1~2,析出大量固体,继续在常温下搅拌0.5h,过滤,滤饼经洗涤、减压干燥、重结晶,得到的白色晶体在红外灯下干燥至恒重后得到4g猪去氧胆酸。
(3)将上步得到的滤液、洗液以及重结晶母液合并,减压回收苯至尽,得到棕色粘稠状物6.7g。加入乙酸酐54ml,乙酸钠8g,于110℃下回流反应5h， TLC监测反应完成后，减压蒸除约2/3体积的乙酸酐,待体系自然降至室温后加水50ml以溶解其中的无机盐,用乙醚分次提取有机物(50ml,30ml,20ml),合并有机相,先用1%的NaOH溶液洗涤有机相至接近中性,再洗涤、干燥2h、减压浓缩，最后以甲醇及苯-石油醚体系重结晶，干燥后得到白色粉末0.8g猪胆酸甲酯三醋酸酯。
(4)取25ml圆底烧瓶,依次加入猪胆酸甲酯三醋酸酯(0.8g),NaOH固体(0.35g),乙醇10ml,水0.4ml,于80℃下回流反应20h, TLC监测反应完毕后,减压回收溶剂,得灰白色固体，加水10ml,剧烈搅拌下用10%稀盐酸调PH至1.5,析出固体,继续于常温下搅拌0.5h,过滤,滤饼依次用10%稀盐酸和水各洗涤3次,得到白色固体,50℃下减压干燥后为0.6g,以乙酸乙酯重结晶,红外灯下干燥至恒重,得白色粉末0.52g,mp188~189℃,即为猪胆酸，总收率为5.2%。
临床前研究
1、曹畅等人探究外源添加猪胆酸(hyocholic acid,HCA)对高脂孕鼠体脂代谢、肠道微生物及胆汁酸代谢的影响,旨在研究猪胆酸对改善小鼠体脂代谢紊乱的作用。选取6周龄体重相近(19.2g±0.1g)、生长状况良好的C57BL/6小鼠雌性68只和雄性23只进行配种,将孕鼠按体重随机分为4个处理组:对照组(CON)、高脂组(T1)、高脂+50mg/kg猪胆酸组(T2)、高脂+100mg/kg猪胆酸组(T3),每组5个重复,每个重复3只。分别在小鼠分娩和断奶当天,测定各组小鼠生长性能及血清生化指标,进行组织切片分析,并在分娩当天取结肠内容物进行肠道菌群和胆汁酸代谢分析。经试验结果表明猪胆酸可通过改善血清生化组成,促进有益菌的生成及胆汁酸代谢,从而调控由高脂饲粮诱导的小鼠体脂代谢紊乱,为猪胆酸在高脂饮食下改善体脂代谢紊乱提供了参考[2]。
2、高永红等人观察大鼠脑微血管内皮细胞缺血再灌注损伤细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响,探讨清开灵有效组分猪胆酸阻抑脑缺血炎症反应的作用途径。在 体外培养大鼠脑微血管内皮细胞,氧糖剥夺法模拟缺血再灌注损伤,采用免疫细胞化学染色和RT-PCR方法半定量检测ICAM-1蛋白和mRNA的表达。结果与正常组比较,模型组ICAM-1蛋白和mRNA的表达明显增高(P＜0.01);与模型组比,猪胆酸显著降低ICAM-1的表达(P＜0.05)。因此， 猪胆酸可能通过干预ICAM-1表达而阻抑脑缺血损伤炎症反应[3]。
参考文献
[1] 安徽华印机电股份有限公司. 一种从猪胆汁中分离猪胆酸的方法:CN201310449525.9[P]. 2014-02-05.
[2] 曹畅,李玉莲,王洁,等. 外源添加猪胆酸对高脂孕鼠体脂代谢、肠道微生物和胆汁酸代谢的影响[J]. 中国畜牧兽医,2025,52(5):1999-2011. DOI:10.16431/j.cnki.1671-7236.2025.05.006.
[3] 高永红,袁拯忠,牛福玲,等. 猪胆酸对体外缺血再灌注大鼠脑微血管内皮细胞ICAM-1的影响[J]. 北京中医药大学学报,2007,30(10):670-673. DOI:10.3321/j.issn:1006-2157.2007.10.007.