凹纹胡蜂(Vespa velutina auraria Smith)是制备云南景颇族的验方-胡蜂酒的原药材之一,胡蜂酒具有治疗风湿性疾病、舒筋活络的作用，经外敷或内服可以改善患者因风湿痹阻导致的手脚麻木、关节酸痛等症状。通过对凹纹胡蜂进行系统的成分分离鉴定,共获得30多个单体成分,其中包括3,4-二羟基苯甲酸甲酯(Methyl 3,4-dihydroxybenzoate,MDHB)。
3,4-二羟基苯甲酸甲酯最初是从植物绿茶中发现的抗氧化多酚的主要代谢产物,具有较好的抗氧化和抗炎作用。有研究已表明3,4-二羟基苯甲酸甲酯在体外可以对TBHP诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤的神经保护作用,证明3,4-二羟基苯甲酸甲酯是一种有效的神经保护化合物,可以减轻细胞的氧化应激。3,4-二羟基苯甲酸甲酯也可以通过抑制小鼠炎症来防止D-半乳糖胺/脂多糖诱导的急性肝损伤,并且3,4-二羟基苯甲酸甲酯可以上调Nrf2并抑制小鼠过度的破骨细胞活性,以治疗骨质疏松症。
因此,本文提出一种3,4-二羟基苯甲酸甲酯的提取方法及其应用。
提取方法[1]
S1、提取：按质量:体积的料液比为1:3～5的比例分别取粉碎凹纹胡蜂风干虫体和乙醇，然后将粉碎凹纹胡蜂风干虫体置入乙醇中浸泡48h，过滤，得到第一次乙醇提取物；再将残渣用同体积的乙醇重复浸泡提取3～4次，每次24h，过滤，与第一次提取物合并，减压回收乙醇，得到凹纹胡蜂乙醇提取物；
S2、萃取：将凹纹胡蜂乙醇提取物与纯水按体积比1:1混合，搅拌混匀，混合液依次用不同极性溶剂萃取，每种溶剂萃取3～5次，将乙酸乙酯萃取物合并，回收乙酸乙酯，得到乙酸乙酯部位。
S3、分离：乙酸乙酯部位经硅胶柱色谱分离，以不同体积比的石油醚和氯仿、氯仿和甲醇进行梯度洗脱，结合TLC结果合并得到组分C1～C11。
S4、将S2中得到组分C1～C11中的组分C3经过硅胶柱色谱分离，以不同体积比的石油醚和丙酮进行梯度洗脱，结合TLC结果合并为9个组份，得到组份C3‑1～C3‑9，将组份C3‑1～C3‑9中的组分C3‑5经不同体积比的乙酸乙酯和丙酮进行梯度洗脱，结合TLC结果合并为10个组份，得到C3‑5‑1～C3‑5‑10组份；将C3‑5‑1～C3‑5‑10组份中的组分C3‑5‑6经硅胶柱色谱和Sephadex LH‑20凝胶不断纯化得到化合物3,4-二羟基苯甲酸甲酯。
参考文献
[1]大理大学. 一种3，4-二羟基苯甲酸甲酯的提取方法及其应用:CN202410352484.X[P]. 2024-06-28.