背景技术
亚甲基二膦酸(MDP)是双磷酸类药物，在临床上主要用于检查骨骼的血供和代谢方面的病变;经99TcO4-标记后的产品(云克)用作类风湿关节炎、强直性脊柱炎等疾病的治疗剂。由于亚甲基二磷酸生产过程中会引入一些杂质,这些杂质(特别是亚磷酸)的存在可能会影响药物临床用药的安全有效性,而且其用量也是严格控制的,因此亚甲基二磷酸原料药中亚磷酸含量分析是质量控制中的一项重要指标。
亚甲基二磷酸属双磷酸类药物,是一种焦磷酸类似物,是将后者的P-O-P连接用P-C-P连接代替。由于其结构中无生色团,极性也较强,因此该类药物的质量控制一般采用重量分析法、酸碱滴定法、络合滴定法和分光光度法、柱前或柱后衍生反相高效液相色谱法等方法。这几种分析方法的缺点是特异性较差,其中柱前或柱后衍生法较繁琐,而且仅能检测到双磷类药物,而不能对其分解产物进行检测;其他几种方法的特异性较差。本研究拟采用反相短碳链C8色谱柱以减少双膦酸在柱上的吸附,配以通用型蒸发光散射器代替传统的紫外检测器对各相关物质进行检测,以解决亚甲基二磷酸及相关物质的分离及检测问题。
检测方法[1]
1、色谱条件
色谱柱:Symmetry C8色谱柱(150mmX4.6mm,5um):Waters公司;流动相:V(30mmol/L正戊胺(用乙酸调节pH5.0)):V(甲醇)=98:2;流速:1mL/min。
蒸发光散射检测器(ELSD):漂移管温度110℃,气体流量:2.7L/min;撞击器位置:off,增益:1。在上述条件下,亚甲基二磷酸的理论塔板数为2141,分离度为10.4,拖尾因子0.97。
2、检测步骤
分别将磷酸二氢钠、亚磷酸、亚甲基二磷酸对照品进样至高效液相色谱系统，采用反相高效液相色谱法分析其亚甲基二磷酸含量,确定样品的保留时间。在相同条件下对亚甲基二磷酸原料进行反相高效液相色谱分析。
3、线性范围
亚甲基二磷酸在600~4000mg/L范围内峰面积A的对数值IgA浓度C对数值lgC呈现良好的线性关系，线性回归方程为:lgA=1.9436 IgC+16.212,r=0.9996,检出限为200mg/L。
4、精密度与重复性
在优化色谱条件下,取浓度为2.07g/L的亚甲基二磷酸对照品溶液,连续进样6次,亚甲基二磷酸峰面积的相对偏差为1.07%。
5、回收率
取浓度为920mg/L和299mg/L亚甲基二磷酸对照品溶液,按两点法进样进行色谱分析,并对分析结果进行线性回归,另外配制3个已知浓度的亚甲基二磷酸对照品溶液,做空白加样回收,回收率为98%~102%，符合检测要求。
6、样品测定
采用两点法进样，对三批样品进行测量,结果亚甲基二磷酸质量含量为95.0%~98.1%，符合检测要求。
参考文献
[1] 赵秀岩,王晓静,付博,等. 高效液相色谱法测定亚甲基二磷酸含量[J]. 同位素,2012,25(1):33-36.