LLC-MK2恒河猴肾细胞是病毒学研究中常用的工具细胞之一。其对多种病毒的广泛敏感性和稳定的培养特性，在病毒分离、疫苗评价和抗病毒药物筛选中发挥着重要作用。其来源是源自六只成年恒河猴/绿猴的肾细胞悬液，经自发永生化形成细胞株，其形态特征为上皮细胞样，贴壁生长。使用DMEM高糖培养基（或MEM）+ 10%胎牛血清（FBS）的培养基进行培养，其中血清的质量对LLC-MK2细胞生长至关重要。使用前需对血清进行质量检测，某些批次的马血清能显著促进其生长，而更换血清类型可能导致生长缓慢。培养环境37℃、5% CO₂、饱和湿度，传代方法为1:2至1:4传代，2-3天换液一次。
在乙型脑炎病毒研究中的应用
乙型脑炎病毒（JEV）是黄病毒科的重要病原体，其滴度测定和疫苗效价评价高度依赖于蚀斑形成试验。在一项比较研究中，研究者将JEV P3株分别接种至MDBK、Vero、LLC-MK2和BHK-21四种细胞，发现JEV在四种细胞上均可产生细胞病变（CPE），但MDBK细胞不能形成蚀斑。在能够形成蚀斑的三种细胞中，LLC-MK2恒河猴肾细胞的病毒收获液滴度达到9.42 lgPFU/ml，介于Vero细胞（10.02 lgPFU/ml）和BHK-21细胞（9.21 lgPFU/ml）之间[1]。
其次，在乙型脑炎灭活疫苗的效价测定中，不同细胞系的结果存在显著差异。研究显示，Vero细胞测定的T值最高，LLC-MK2细胞次之，BHK-21细胞最低。统计学分析表明，LLC-MK2恒河猴肾细胞与BHK-21细胞相比，蚀斑减少率及对应T值差异无统计学意义，但与Vero细胞的差异具有统计学意义[1]。这表明，LLC-MK2恒河猴肾细胞可作为乙脑疫苗效价检测的备选细胞系。
在人偏肺病毒复制研究中的优势
人偏肺病毒（hMPV）是2001年新发现的呼吸道病毒病原，其分离培养的适宜细胞系一直是学界关注的焦点。一项系统研究中，研究者将hMPV A亚型标准株hMPV/NL/1/00和B亚型标准株hMPV/NL/1/99分别接种于Vero、Vero-E6、LLC-MK2、A549和HEp-2五种细胞[2]。结果显示，感染hMPV后3天，即可在Vero、Vero-E6、LLC-MK2恒河猴肾细胞和A549细胞中观察到CPE，表现为细胞圆缩、呈簇状、逐渐拉网状改变并脱落，无显著的合胞形成。LLC-MK2细胞中两种亚型hMPV所致的CPE无明显差别。同时，通过实时荧光定量PCR检测hMPV F蛋白基因的复制动力学发现，hMPV在LLC-MK2恒河猴肾细胞中可稳定传代，病毒拷贝数始终维持在较高水平[2]。相比之下，hMPV在A549和HEp-2细胞中传至第3代即检测不到病毒RNA。
这一研究证实，LLC-MK2恒河猴肾细胞与Vero、Vero-E6细胞同属适合hMPV培养的细胞系，而A549和HEp-2细胞则不适合用于hMPV的分离与培养[2]。
在抗病毒药物评价中的角色
在抗病毒药物体外药效学研究中，LLC-MK2恒河猴肾细胞同样扮演着重要角色。一项针对人干扰素α1b（IFNα1b）广谱抗呼吸道病毒活性的研究中，研究者采用CPE法检测了IFNα1b对包括LLC-MK2恒河猴肾细胞在内的多种细胞系的毒性。结果显示，IFNα1b对LLC-MK2细胞的CC₅₀值大于10 000 U·mL⁻¹，表明其在该细胞系中具有较高的安全窗口[3]。
在该研究中，LLC-MK2恒河猴肾细胞被用于检测IFNα1b对人副流感病毒3型（HPIV3）的抑制效果。通过间接免疫荧光法（IFA）检测，IFNα1b抑制HPIV3病毒的EC₅₀为3.92 U·mL⁻¹[3]。这一结果验证了LLC-MK2恒河猴肾细胞作为HPIV3感染模型的有效性，也为干扰素类药物的体外活性评价提供了可靠的技术平台。
参考文献
[1] 庞雪，张嵘，姚宇，等. 不同细胞对乙型脑炎病毒蚀斑减少中和试验的影响[J]. 中国生物制品学杂志，2016，29(2)：140-143.
[2] 余薇薇，赵晓东，赵耀. 人偏肺病毒标准株在不同细胞中的复制动力学[J]. 中国生物制品学杂志，2011，24(3)：266-269.
[3] 刘琳琳，王晓波，苏畅，等. 人干扰素α1b体外抗呼吸道病毒的药效学研究[J]. 中国药物评价，2024，41(3)：222-232.