介绍
氯酚红（Chlorophenol Red, CPR）是一种三苯甲烷类磺酰酞染料，分子式为C₁₉H₁₂Cl₂O₅S，呈砖红色结晶粉末，难溶于水但易溶于乙醇和稀碱溶液。具有敏锐的酸碱响应特性，pH变色范围为4.8（黄色）至6.8（紫红色），常作为pH指示剂用于细胞培养基监测、尿液比重检测及生化分析；此外，因其可被特定脱氢酶还原褪色，也广泛用作微生物生长及酶活力检测的显色底物。
图一 氯酚红
检测应用
以氯酚红作探针，采用可见光区褪色分光光度法来研究乌拉地尔的检测方法。在弱碱性溶液中，乌拉地尔可与氯酚红反应，生成新的物质，新物质的吸光度绝对值与一定质量浓度范围的乌拉地尔的质量浓度服从朗伯-比尔定律。该法用于药物中乌拉地尔的测定，结果满意。
溶液配制
CPR溶液：准确称取0.423 3g氯酚红，加20mL无水乙醇溶解后用水稀释至1 000 mL，即为1.00×10-3 mol/L;URD标准溶液：准确称取0.023 17g乌拉地尔对照品，加10mL无水乙醇溶解后转移至100mL容量瓶中，用二次蒸馏水定容，配成231.7mg/L贮备液，冰箱4℃保存；临用时取贮备液用水稀释配成23.17mg/L操作液。缓冲溶液：pH 3.0～9.8Tris-盐酸溶液。
URD标准曲线及相关系数
取23.17mg/L乌拉地尔0.20～1.40 mL于10mL具塞比色管中，再加入2.00mL 1.0×10-3mol/L氯酚红溶液和1.00mL pH 7.93Tris-盐酸缓冲溶液，定容，摇匀，5min后，在U-4100型紫外-可见-近红外分析仪上扫描吸收光谱（以试剂空白作参比），测定600nm波长处溶液的吸光度（A）。作600nm波长处体系的A-c标准曲线（图1）。方法的一元线性回归方程为A=0.000 348 9-0.062 59c(mg/L），回归系数（r)=-0.999 8，线性范围为0～3.7 mg/L，表观摩尔吸光系数（κ）为1.44×104 L·mol-1·cm-1。
图二为乌拉地尔与氯酚红的吸收光谱图。在可见光区，乌拉地尔溶液几乎无吸收；氯酚红的弱碱性溶液有较强吸收，最大吸收波长位于572nm。在乌拉地尔溶液中加入氯酚红溶液（pH7.93）后，溶液红色变浅，溶液发生褪色现象，光谱曲线上出现2个明显的负吸收峰，分别位于600nm（红移28nm）和548nm（蓝移24nm），波移表明，氯酚红与乌拉地尔在弱碱性条件下发生反应后确实生成了新物质。新物质的最大负吸收峰是在600nm波长处，次大负吸收峰是548nm，在此两波长处，当在氯酚红的弱碱性溶液中加入不同质量浓度的乌拉地尔溶液时，体系溶液的吸光度与一定质量浓度范围内的乌拉地尔（URD）的质量浓度呈线性关系，并服从朗伯-比尔定律。该方法两波长处均可用于乌拉地尔的定量测定[1]。
图二 乌拉地尔与氯酚红的吸收光谱图
参考文献
[1]王润莲,江虹,吴文婕.氯酚红探针可见吸收光谱法测定乌拉地尔[J].化学世界,2020,61(2):105-109.DOI:10.19500/j.cnki.0367-6358.20180706.