Cy7.5-琥珀酰亚胺/活化酯
| 中文名称 | Cy7.5-琥珀酰亚胺/活化酯 |
|---|---|
| 中文同义词 | CY7.5-琥珀酰亚胺酯(环己烯);花菁染料CY7.5标记N-羟基琥珀酰亚胺酯;花氰染料CY7.5-活性酯 |
| 英文名称 | Cyanine7.5 NHS ester |
| 英文同义词 | Cyanine7.5 NHS ester;Cy7.5 NHS;Cy7.5 SE;Cyanine7.5 NHS ester(Cyclohexene) |
| CAS号 | 1469541-54-5 |
| 分子式 | C49H52N3O4+ |
| 分子量 | 746.97 |
| EINECS号 | |
| 相关类别 | 荧光染料 |
| Mol文件 | 1469541-54-5.mol |
| 结构式 |  |
Cy7.5-琥珀酰亚胺/活化酯 性质
| 溶解度 | 可溶于DMF等有机溶剂 |
|---|---|
| 外观 | Green solid |
| 激发峰(Ex)/发射峰(Em) | 784/814nm (MeOH/PBS buffer) |
| ε(消光系数) | 223000 L⋅mol−1⋅cm−1 |
| Φ(量子产率) | 0.10 |
Cy7.5 (Cyanine 7.5) 是一种发近红外（NIR）荧光的花青素荧光染料。Cy7.5的荧光波长很长，发射峰（Em max）大于800nm，恰好处于肌体组织近红外窗口 I 的区域（肌体的血液，体液和组织此区域背景荧光弱，而长波长穿透性强），所以Cy7.5的标记物常应用于小动物活体体内成像中。Cy7.5可以用来标记蛋白，抗体，多肽等。另外，由于近红外荧光背景低，Cy7.5标记的二抗常常用于荧光蛋白免疫印迹(Western Blot)。
NHS活化酯 （N-羟基琥珀酰亚胺酯，N-hydroxysuccinimide ester，succinimidyl ester）是生物标记反应中最常用的活化基团。它活化Cy7.5分子中的羧基，让它可以和目标生物分子上的胺基（伯胺或者仲胺）反应生成稳定的酰胺键，从而把Cy7.5分子标记到生物大分子上。由于游离胺基是蛋白，抗体，多肽表面的常见官能团（来自于赖胺酸侧链），Cy7.5-NHS可以和它们直接反应。核酸分子中天然不带游离胺基，只有胺基修饰过的RNA或者DNA才可以和Cy7.5-NHS反应。
Cy7.5-NHS活化酯的水溶性较低，所以在水相的标记反应体系内需要使用有机共溶剂，常用有机溶剂包括DMF，DMSO和乙腈等。如需标记的分子对有机溶剂敏感，可选择磺化花青素（sulfonated cyanine），即sulfo-Cy7.5-NHS活化酯。两者的光谱性质几乎一致，因此大部分应用可相互替换。两者的主要区别在于：磺化染料是水溶性的，在水相的标记反应体系内不需要使用有机共溶剂，并且降低染料在水中聚集的可能性，增强标记效率。
Cy7.5-NHS标记后的产物Ex/Em是784/814nm。和它具有相似荧光特性的染料包括Alexa Fluor 790，DyLight 800，吲哚菁绿(indocyanine green, ICG)等。
ex/em : 784/814nm(MeOH/PBS缓冲液)
消光系数(ε) : 223000 L⋅mol−1⋅cm−1
量子产率(Φ) : 0.10
NHS活化酯 （N-羟基琥珀酰亚胺酯，N-hydroxysuccinimide ester，succinimidyl ester）是生物标记反应中最常用的活化基团。它活化Cy7.5分子中的羧基，让它可以和目标生物分子上的胺基（伯胺或者仲胺）反应生成稳定的酰胺键，从而把Cy7.5分子标记到生物大分子上。由于游离胺基是蛋白，抗体，多肽表面的常见官能团（来自于赖胺酸侧链），Cy7.5-NHS可以和它们直接反应。核酸分子中天然不带游离胺基，只有胺基修饰过的RNA或者DNA才可以和Cy7.5-NHS反应。
Cy7.5-NHS活化酯的水溶性较低，所以在水相的标记反应体系内需要使用有机共溶剂，常用有机溶剂包括DMF，DMSO和乙腈等。如需标记的分子对有机溶剂敏感，可选择磺化花青素（sulfonated cyanine），即sulfo-Cy7.5-NHS活化酯。两者的光谱性质几乎一致，因此大部分应用可相互替换。两者的主要区别在于：磺化染料是水溶性的，在水相的标记反应体系内不需要使用有机共溶剂，并且降低染料在水中聚集的可能性，增强标记效率。
Cy7.5-NHS标记后的产物Ex/Em是784/814nm。和它具有相似荧光特性的染料包括Alexa Fluor 790，DyLight 800，吲哚菁绿(indocyanine green, ICG)等。
- NHS ester基团对湿度比较敏感，务必干燥保存产品。使用前产品需放到室温回温至少20分钟。
- 使用不含氨基的缓冲体系。比如磷酸钠缓冲液（PBS），Hepes缓冲液，碳酸氢钠缓冲液，或硼酸缓冲液等。不要使用任何含伯胺或仲胺的缓冲液，比如Tris，甘氨酸等。高浓度咪唑(imidazole)也会影响反应。
- 标记反应不要放在强光下，因为大部分荧光化合物在强光下长时间照射会缓慢光漂泊。
化学性质
外观 : 绿色固体ex/em : 784/814nm(MeOH/PBS缓冲液)
消光系数(ε) : 223000 L⋅mol−1⋅cm−1
量子产率(Φ) : 0.10