背景[1-3]
禽传染性喉气管炎病毒(AiLTV)核酸试剂盒(荧光-PCR法)适用于检测禽传染性喉气管炎病毒(AiLTV)的DNA，用于禽传染性喉气管炎病毒(AiLTV)感染的辅助诊断，其检测结果仅供参考。本产品不提供活体样品做阳性对照，仅提供人工合成的特异性DNA片段标准品作为阳性对照，仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗用途。
传染性喉气管炎病毒是疱疹病毒科α疱疹病毒亚科成员，具有二十面体核衣壳结构，直径约100nm，在低温环境中可存活超过310天。该病毒通过呼吸道分泌物传播，成年鸡感染后主要表现为咳血性黏液、气管堵塞等急性症状，产蛋鸡群感染可造成15%-60%的产蛋量下降。防控体系以弱毒活疫苗免疫为核心，配合环境消毒和饲养管理措施，发病时采用中西药结合治疗方案。
禽传染性喉气管炎病毒(AILTV)PCR检测试剂盒采用荧光定量PCR技术，结合特异性探针设计，灵敏度高达500拷贝/μL以下，可精准检测病毒核酸，避免传统方法中假阳性或假阴性的问题。一管式反应体系简化操作流程，逆转录与扩增同步完成，显著缩短检测时间，同时降低污染风险。
禽传染性喉气管炎病毒(AiLTV)核酸试剂盒(荧光-PCR法)
适用仪器:ABI7500、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf等系列荧光定量PCR检测仪。
标本采集:病死或扑杀禽，取喉头、气管、肺组织；活禽用棉拭子取口咽或气管分泌物，放于50%甘油生理盐水中。
保存和运输:采集或处理好的样品在2℃~8℃条件下保存应不超过24 h；若需长期保存，应放置-70℃以下保存，冻融不超过3次。
禽传染性喉气管炎病毒(AiLTV)核酸试剂盒(荧光-PCR法)操作步骤:
1.样品处理（样本处理区）
1.1样本前处理
1.2DNA提取
2.试剂配制（试剂准备区）
3.加样（样本处理区）
4.PCR扩增（核酸扩增区）
5.结果分析判定
应用[4][5]
禽传染性喉气管炎病毒(AiLTV)核酸试剂盒(荧光-PCR法)可以用于鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定及鸡5种病毒多重PCR诊断方法的初步建立
鸡传染性支气管炎（Infectious bronchitis,IB）、禽流感（Avian influenza,AI）、新城疫（Newcastle disease,ND）、鸡传染性法氏囊病（Infectious bursal disease,IBD）和鸡痘（Fowl pox,FP）是禽常见的重要病毒病。由于IBV有着较大的抗原性差异以及国内广泛的应用针对IBV不同血清型的疫苗,所以分离当地流行毒株并对其S1基因进行遗传进化分析,对于研究可持续的疫苗接种策略非常重要。IB、AI、ND、IBD及FP具有高度传染性,常发生混合感染或继发感染,建立一种简便、快速能同时检测5种病原的多重PCR诊断方法,有助于禽类疾病的预防和快速诊断。
1.从乌鲁木齐市某鸡场无菌采集疑似IB鸡只的组织样品,进行病毒分离鉴定。通过分子生物学试验、血凝特性试验、鸡胚矮小化试验、新城疫病毒干扰试验、鸡胚半数感染量测定、致病性试验及部分理化特性试验表明,分离株在鸡胚上连传5代出现侏儒胚现象并且可以抑制NDV在鸡胚中的增殖,只有经过1%的胰酶处理之后才可对鸡红细胞起到凝集作用,经计算其EID50为10-4.58/0.1m L,为中等毒力毒株,攻毒组较正常组雏鸡气管内有大量粘液且肺脏肿大,表现为呼吸型毒株特征,对热、脂溶剂敏感,对1%胰蛋白酶有一定的耐受性,对酸的耐受性要差于对碱的耐受性。证实该病原为IBV毒株。2.将分离株S1基因测序结果与Genbank已发表参考株S1基因进行遗传进化分析,结果显示,该分离株与IBV/I0221/17/China株关系最近,二者单独形成一个分支,其与TC07-2株、GX-NN09032株、ck/CH/IBTZ株及CK/CH/GD/HY16株形成一个独立的发育进化群,均属于TC07-2/GVI-1型IBV;与国内常用的H120、H52、M41等疫苗株的同源性仅为59%～65%,其S蛋白裂解位点序列为HRRKR,将其命名为IBV/CK/CH/01/2020株。3.依据NCBI核酸数据库中IBV、AIV、NDV、IBDV及FPV基因序列,设计5对特异性引物,基于禽传染性喉气管炎病毒(AiLTV)核酸试剂盒(荧光-PCR法)优化退火温度、反应循环数和引物浓度,进行特异性、敏感性试验,并进行临床检测。结果表明,建立的多重PCR方法对IBV、AIV、NDV、IBDV和FPV基因组DNA或c DNA均能有效扩增,对鹅细小病毒（GPV）、禽传染性喉气管炎病毒（ILTV）、禽4型副黏病毒（APMV-4）的核酸均无特异性扩增,特异性较强,对IBV、AIV、NDV、IBDV、FPV的重组质粒最低检测限分别为1×10～5拷贝/μL、1×10～4拷贝/μL、1×10～4拷贝/μL、1×10～4拷贝/μL、1×10～4拷贝/μL,41份自然感染禽样品检测结果与单一PCR的检测的符合率为90.32%,表明所建立的多重PCR检测方法具有较好的特异性、敏感性和临床适用性。
参考文献
[1]Infectious Bronchitis Coronavirus Infection in Chickens:Multiple System Disease with Immune Suppression.[J].M.Najimudeen Shahnas;H.Hassan Mohamed S.;C.Cork Susan;AbdulCareem Mohamed Faizal.Pathogens(Basel,Switzerland).2020
[2]Multiplex PCR analysis of virulence genes and their influence on antibiotic resistance in Enterococcus spp.isolated from broiler chicken[J]..Journal of Veterinary Science.2019
[3]Development of a multiplex PCR assay for the simultaneous and rapid detection of six pathogenic bacteria in poultry.[J].Wang Zhihao;;Zuo Jiakun;;Gong Jiansen;;Hu Jiangang;;Jiang Wei;;Mi Rongsheng;;Huang Yan;;Chen Zhaoguo;;Phouthapane Vanhnaseng;;Qi Kezong;;Wang Chen;;Han Xiangan.AMB Express.2019
[4]Molecular and biological characteristics of the infectious bronchitis virus TC07-2/GVI-1 lineage isolated in China[J].Mengting Ren;;Jie Sheng;;Tianxin Ma;;Liwen Xu;;Zongxi Han;;Huixin Li;;Yan Zhao;;Junfeng Sun;;Shengwang Liu.Infection,Genetics and Evolution.2019
[5]马彩红.鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定及鸡5种病毒多重PCR诊断方法的初步建立[D].新疆农业大学,2021.