冬凌草[Rabdosia rubescens]系唇形科香茶菜属植物，冬凌草乙素(Ponicidin,PON)是从其中提取出来的一种二萜类化合物。既往作用。既往的体外研究资料表明，冬凌草乙素具有体外抗肿瘤作用，其抗肿瘤作用机制可能与抗突变作用、降低肿瘤细胞的钠泵转运活性从而延缓肿瘤细胞的生长速度、逆转肿瘤细胞的耐药性、增强抗肿瘤药物的疗效等有关间。新近资料表明，冬凌草乙素可通过诱导胆管癌细胞凋亡而发挥抗肿瘤凌草乙索可以通过调节某些凋亡相关基因的变化而诱导实体瘤如肺癌，以及人白血病细胞系U937、THP-1等肿瘤细胞的凋亡，从而发挥抗肿瘤作用。
活性研究
1、为观察冬凌草乙素对白血病HL-60细胞的体外增殖抑制作用及其机制。刘晓丹等人以不同浓度的冬凌草乙素(10-50μmol/L)作用于体外培养的HL-60细胞24,48,72h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞周期,免疫印迹法检测Caspase-3及其裂解底物多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)表达水平的变化,并对细胞周期调节蛋白P21、P16的表达水平进行检测。结果与结论:冬凌草乙素可显著抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量-效与时-效关系，流式细胞术检测结果表明细胞主要被阻滞在G0/G1期,50μmol/L的冬凌草乙素作用48h后可以出现典型的亚G1期峰(细胞凋亡峰)。免疫印迹法检测结果显示Mr32000的Caspse-3酶被活化出现Mr20000亚单位片段,同时Caspse-3的底物PARP被裂解出现Mr89000的亚单位片段,免疫印迹法检测结果还显示50μmol/L的冬凌草乙素作用不同时间后,细胞周期调节蛋白P21及P16的表达水平逐渐升高。结果提示冬凌草乙素在体外对HL-60细胞具有显著的细胞周期阻滞作用,并诱导细胞发生凋亡,通过上调细胞周期调节蛋白P21及P16的表达水平及激活Caspse-3可能是冬凌草乙素引起HL-60细胞G0/G1阻滞及诱导细胞发生凋亡的重要作用机制之一[1]。
2、为探讨冬凌草乙素对U937细胞的生长抑制作用及其作用机制。刘加军等人以不同浓度的冬凌草乙素作用于体外培养的U937细胞,MTF法检测细胞生长抑制率,应用hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡;采用RT-PCR对细胞凋亡前后β-catenin的表达水平进行检测。结果:冬凌草乙素可显著抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量-效与时-效关系，在冬凌草乙素抑制细胞增殖过程中β-catenin的表达水平显著下降。结论:冬凌草乙素能抑制U937细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,降低β-catenin的表达水平可能是其重要作用机制之一，这为冬凌草乙素抗白血病的进一步研究提供了有力的实验依据[2]。
参考文献
[1]刘晓丹,刘文达,王春芝,等. 冬凌草乙素对白血病HL-60细胞的增殖抑制作用[J]. 中国组织工程研究与临床康复,2010,14(27):5062-5066. DOI:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.27.028.
[2]刘加军,刘文达,刘晓丹,等. 冬凌草乙素对U937细胞的生长抑制作用及β-catenin表达水平的影响[J]. 实用医学杂志,2010,26(17):3077-3079. DOI:10.3969/j.issn.1006-5725.2010.17.001.